아플라톡신 B1의 결정, 그룹 1의 발암물질, 와이엘 LCMS-TQ9200 LC-MS/MS 시스템

아플라톡신 B₁이중 대사물질은 주로 아스퍼길러스 플라브스아플라토킨 가족 중에서는 가장 강력한 독성을 나타내며 가장 널리 분포합니다.그것은 세포 내 DNA 및 RNA 합성을 억제하고 단백질 대사를 방해함으로써 독성 효과를 발휘합니다.간에 매우 타겟화된 해로운 영향을 미친다.아플라톡신 B는 오크라톡신과 파툴린과 같은 다른 미코톡신과 비교했을 때₁그것은 매우 독성이 있으며 탄탄한 발암성이 있습니다. 1 그룹 발암물질세계 보건 기구 (WHO) 에 의해 발견 됩니다. 땅콩, 옥수수, 견과류 및 식물성 기름과 같은 기름성 작물에서 자주 발견 됩니다.전 세계적으로 식품 안전 통제에 우선 순위 오염 물질로.

아플라톡신 B 오염₁일반적으로 기름성 작물들이 심기, 수확 또는 저장 과정에서 높은 온도와 습도에 노출되면 발생하며, 이는 곰팡이 성장을 촉진합니다.안정적인 화학적 특성으로 인해아플라톡신 B₁전통적인 조리 온도에서 파괴될 수 없기 때문에 농산물과 가공 식품의 잔류 문제가 반복됩니다.

높은 복용량을 단기적으로 섭취하면 급성 중독이 발생할 수 있으며 심한 경우 사망에 이를 수 있는 심한 복통, 구토, 황색 및 간부전 등의 증상이 나타날 수 있습니다.장기간 낮은 용량으로 노출되면 간에 축적됩니다., 간 섬유증과 간경화와 같은 만성 간 손상을 유발하고 심지어 초기 간암을 유발할 수 있습니다.간 질환이 있는 환자, 아플라톡신 B의 위험이 높습니다.₁독감

중국에서는 국가 표준 GB 2761-2017 (국가 식품 안전 표준 ∼ 식품 내 미코 독소의 최대 함량) 에서 아플라토킨 B의 최대 잔류 수치를 명시합니다.₁다양한 종류의 음식에 포함됩니다. GB 5009.22-2016 (국가 식품 안전 표준 (식품 내의 아플라톡신 B 및 G의 결정)아플라톡신 B의 결정에 대한 공식적인 분석 방법을 제공합니다.₁.

이 응용 설명서는 아플라토킨 B의 결정을 위해 동위원소 희석 액체 염색체-타렌드 질량 분광기 (LC-MS/MS) 방법의 수립을 설명합니다.₁Wayeal LCMS-TQ9200 LC-MS/MS 시스템을 이용합니다.

키워드:삼중 사극, 아플라톡신 B₁; 동위원소 희석 액체 염색체 - 탕덤 질량 분광.

1기기 및 반응제

1.1 기기 구성

표 1 기기 구성 목록

1.2 반응제와 표준

표 2 반응기 및 표준

1.3 실험물질 및 보조장비

소용품:

고속 원심분리기

분석 균형

원심분리기

고분기 추출 (SPE) 분수 (vakuum pump)

질소 증발기

쉐이커

2실험 방법

2.1 용액 준비

2.1.15 mmol/L 암모늄 아세타트 용액:0.39g의 암모늄 아세테이트를 무게를 두고 물에 녹여 1000mL까지 희석하고 잘 섞어

2.1.1 메탄올-아세토니트릴 용액:100mL의 메탄올에 100mL의 아세토니트릴을 첨가하고 잘 섞습니다.

2.2 표본 전처리

2.2.1 샘플 추출

밀가루를 2mm 개막의 테스트 시트를 통과시켜 샘플의 5g (정밀 0.01g) 을 50mL 원심 피난관 튜브에 가량합니다.μ동위원소 내부 표준 작업 용액 (100ng/mL) 1L, 소용돌이를 통해 혼합하고 30분 동안 놔두고, 20mL의 메탄올-물 용액 (70+30, v/v) 을 첨가하고, 소용돌이를 혼합합니다.그리고 20분 동안 궤도 쉐이커에 흔들고10분 동안 6000r/min에서 원심분해 후속 사용을 위해 수퍼나텐트를 수집합니다.

2.2.2 샘플 정화

4 ml의 초상수분을 1 ml의 1% 트리톤 X-100을 PBS에 넣고 잘 섞어 넣습니다.

면역 친밀성 열에 있는 원래 액체가 완전히 닦아지면 위의 샘플 용액을 50 ml 주사통으로 옮기십시오.유출액을 조절하여 샘플 용액이 1 ∼3 mL/min의 속도로 열을 통과하도록 합니다.표본 용액이 완전히 배수된 후 주사통에 2 × 10 mL의 물을 첨가하고 일정한 흐름 속도로 면역 친밀성 기둥을 씻습니다. 물이 배수된 후진공 펌프를 사용하여 기둥을 건조합니다..

진공 시스템을 끊고, 10mL 정도 된 시험관을 면역성 열 아래로 넣고, 50mL 주사통을 꺼내그리고 2 × 1 mL의 메탄올을 첨가하여 1 ∼ 3 mL/min의 제어된 흐름 속도로 기둥을 유출합니다.그 다음 진공 펌프를 사용하여 다시 기둥을 건조합니다. 모든 환출물을 시험관으로 수집합니다.50 °C의 질소 흐름 아래에서 거의 건조해질 때까지 에루아트를 부드럽게 증발시킵니다. 초기 이동 단계의 1 ml를 추가하고 잔액을 녹이기 위해 30 초 동안 소용돌이를 가집니다. 0.22μm 막 필터, 그리고 후속 주입을 위해 자동 샘플러 용기에 필트레이트를 수집합니다.

2.3 실험 조건

2.3.1 액체 염색법

열: C18, 1.7μm, 2.1×50mm

이동 단계 단계: A: 메탄올-아세토니트릴 용액; B 단계: 5mmol/L 암모늄 아세테트 용액

흐름 속도: 0.3 mL/min

기둥 온도: 40°C

주입 부피: 3μL

2.3.2 질량 분광 방법

표 3 화합물 질량 분광 매개 변수

참고: 항성 (*) 은 양적 이온을 나타냅니다.

3실험 결과

3.1 표준 염색체

아플라톡신 B의 결정₁그리고 동위원소 내부 표준 13C17-아플라톡신 B₁5분 이내에 완료되었습니다. 그림 1에서 나타낸 바와 같이, 두 분석체 모두 훌륭한 피크 모양과 만족스러운 반응을 보여주었고, 실험 분석의 요구 사항을 충족했습니다.

그림 1 아플라톡신 B의 염색체₁그리고 동위원소 내부 표준 13C17- 네-아플라톡신 B₁

3.2 선형 범위

An appropriate volume of the standard stock solution and mixed isotope internal standard working solution were accurately transferred and diluted with the initial mobile phase to prepare a series of standard working solutions with aflatoxin B₁50, 20, 10, 5, 2, 1 및 0.5ng/mL의 농도. 각 용액은 2ng/mL의 농도에서 동위원소 내부 표준을 포함했습니다. 이러한 표준을 사용하여 캘리브레이션 곡선이 구성되었습니다.0의 선형 범위 이상.5∙50ng/mL, 그리고 13C 17-아플라톡신 B를 사용하여 수정한 후₁내부 표준으로 측정된 아플라토킨 B와 명목 아플라토킨 B 사이의 오차₁수치가 허용되는 최대 오차 내에서 나타났습니다. 상관 계수 (R) 는 0보다 높았습니다.999, 우수한 선형성을 나타냅니다.

그림 2 아플라톡신 B의 표준 곡선₁

3.3 반복 가능성

표준 용액은 3개의 농도 (1, 10, 20 ng/ mL) 로 6번 연속 주입되었습니다. 결과는 아래 표에서 나타났습니다.아플라톡신 B의 상대적 표준편차 (RSD) 및 샘플 양₁낮은, 중간, 높은 농도에서 모두 5% 안에 실험의 요구 사항을 충족.

표 4 아플라톡신 B에 대한 반복성 검사₁낮은, 중간, 높은 농도에서

3.4 스파이크 복구

아플라톡신 B₁표준 용액이 샘플에 첨가되어 최종 농도가 5ng/mL로 이루어졌습니다. 첨가 된 샘플은 LC-MS/MS로 분석되었습니다. 6 개의 연속 주입의 평균 결과는 5였습니다.147ng/mL1,954%의 RSD로 계산된 회복율은 102.94%로 실험의 요구 사항을 충족합니다.

3.5 빈 잔류

20 ng/ mL 표준 용액을 연속적으로 주입한 후 빈 샘플을 투여하여 전달을 평가했습니다. 그림 3에 나타낸 바와 같이 빈 샘플에서 전송이 검출되지 않았습니다.

그림 3 화합물의 빈 염색체

3.6 샘플 테스트

아플라톡신 B₁샘플 A (그림 4) 에서 검출되지 않았습니다.

그림 4 아플라톡신 B의 염색체₁샘플 A에서

4결론

이 연구에서, 아플라토킨 B의 결정을 위해 동위원소 희석 액체 염색체-동동 질량 분광 (LC-MS/MS) 방법이 사용되었습니다.₁와이엘 LCMS-TQ9200 액체 염색체 탕덤 질량 분광계를 사용하여 확인되었습니다.얻어진 데이터는 모든 염색학적 피크가 꼬리 없이 좋은 피크 형태를 나타낸다는 것을 보여줍니다.감수성은 실험 요구 사항을 충족하고 상관 계수 (R) 는 0보다 크다.999, 선형성 기준을 충족합니다. 낮은 농도, 중간 농도 및 높은 농도에서 반복성은 5% 이내이며 고 농도의 샘플 주입 후 시스템 전달이 관찰되지 않습니다.이 결과는, 와이엘 액체 염색체-동렬 질량 분광 시스템으로 장착되면 대상 표본의 질적 및 양적 분석의 요건을 충족시킵니다.