웨이엘 LCMS-TQ9200 액체 염색체-타멘드 질량 분광 시스템을 사용하여 돼지고기 내 β-아고니스트 잔류의 결정

이 실험은 "GB 31658.22-2022 국가 식품 안전 표준 — 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분석법으로 동물 유래 식품에서 β-작용제 잔류물 측정"을 참조하며, Wayeal LCMS-TQ9200 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분석 시스템을 사용하여 돼지고기 내 β-작용제의 함량을 측정합니다. 실험 결과, 시스템 적합성 테스트에서 잘 형성된 피크와 우수한 선형성을 보여 실험 요구 사항을 충족했습니다. β-작용제 표준 작업 용액의 유지 시간 재현성은 1% 미만이었고, 피크 면적 재현성은 3% 미만으로 우수한 재현성을 나타냈습니다. β-작용제 감도 테스트 용액의 경우, 0.2ng/mL 및 0.5ng/mL 농도에서 주 피크의 신호 대 잡음비가 각각 3 및 10 이상으로 실험 요구 사항을 충족했습니다.

돼지고기 시료 테스트에서 β-작용제는 검출되지 않았습니다. 위의 모든 데이터는 표준 방법에서 지정한 기기 요구 사항을 충족합니다..

키워드: 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분석법; β-작용제; 클렌부테롤; 식품 안전.

1. 기기 및 시약

1.1 LCMS 구성 목록

표 1 기기 구성 목록

1.2 시약 및 표준 물질

표 2 시약 및 표준 물질 목록

1.3 실험 재료 및 보조 장비

초음파 세척기

볼텍스 믹서

수조 항온 진탕기

고속 원심분리기

2. 실험 방법

2.1 시료 전처리

2.1.1 효소 가수 분해 및 추출

시료 2g을 (±0.05g 정확도로) 50mL 원심 분리 튜브에 넣고, 0.2mol/L 아세트산 암모늄 완충 용액 6mL와 β-글루쿠로니다제/아릴설파타제 40μL를 첨가합니다. 철저히 혼합하기 위해 볼텍스하고, 37°C에서 16시간 동안 수조에서 흔들면서 어둡게 배양합니다. 이후 사용을 위해 실온으로 냉각합니다.

2.1.2 추출, 정제 및 농축

준비된 용액을 취하여 100ng/mL 내부 표준 작업 용액 100μL를 첨가하고, 철저히 혼합하기 위해 볼텍스하고, 8000r/min에서 8분 동안 원심 분리합니다. 상등액을 수집하고, 0.1mol/L 과염소산 용액 5mL를 첨가하고, 혼합하기 위해 볼텍스하고, 과염소산을 사용하여 pH를 1.0 ± 0.2로 조정합니다. 8000r/min에서 8분 동안 원심 분리한 후, 10mol/L 수산화 나트륨 용액을 사용하여 상등액의 pH를 10 ± 0.5로 조정합니다. 아세트산 에틸 15mL를 첨가하고, 중간 속도로 5분 동안 흔들고, 5000r/min에서 5분 동안 원심 분리합니다. 상부 유기층을 수집합니다. 남은 수층에 tert-부틸 메틸 에테르 10mL를 첨가하고, 중간 속도로 5분 동안 흔들고, 5000r/min에서 5분 동안 원심 분리하고, 상부 유기층을 수집합니다. 모든 유기층을 합하고, 50°C에서 질소 기류 하에서 건조될 때까지 증발시킵니다. 잔류물을 2% 포름산 용액 5mL에 용해하고 따로 보관합니다. 3mL의 메탄올과 3mL의 2% 포름산으로 순차적으로 활성화하여 혼합 모드 양이온 교환 고체상 추출 컬럼을 준비합니다. 준비된 용액을 컬럼에 넣고, 3mL의 2% 포름산과 3mL의 메탄올로 순차적으로 헹구고, 진공 하에서 건조합니다. 5% 암모니아화 메탄올 용액 3mL로 컬럼을 용출합니다. 50°C에서 질소 기류 하에서 용출액을 건조될 때까지 증발시킵니다. 잔류물을 0.5mL의 메탄올–0.1% 포름산 용액(10:90, v/v)에 재용해하고, 철저히 혼합하고, 0.22μm 미세 다공성 막을 통해 여과하여 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분석법으로 분석합니다.

2.2 실험 조건

2.2.1 액체 크로마토그래피 조건

크로마토그래피 컬럼: C18, 1.8μm 2.1*100mm

이동상: A: 물 중 0.1% 포름산; B: 메탄올

유속: 0.3 mL/min

컬럼 온도: 40°C

주입량: 3μL

3. 시스템 적합성 테스트

시스템 적합성 테스트는 표적 피크가 잘 형성되었고 다른 불순물 피크의 간섭이 없음을 보여 실험 요구 사항을 충족합니다.

그림 1 7가지 β-작용제 테스트의 크로마토그램 (1ng/mL)

3.2 선형 범위

β-작용제 표준 용액을 취하고 중간 농도 작업 용액을 사용하여 단계적으로 표준 곡선을 준비했습니다. 7가지 β-작용제의 선형 범위는 0.5–50ng/mL였으며, R² > 0.99로 우수한 선형 관계를 나타냈습니다.

표 3 β-작용제 선형 범위 표

그림 2 7가지 β-작용제의 표준 곡선 크로마토그램

3.3 검출 한계 (LOD) 및 정량 한계 (LOQ)

이 방법에서 β-작용제의 검출 한계 (LOD) 및 정량 한계 (LOQ)는 각각 0.2ng/mL 및 0.5ng/mL로 설정되었습니다. 이 방법의 각 화합물에 대해, LOD 및 LOQ에 대한 지정된 농도에서의 신호 대 잡음비는 각각 3 및 10 이상으로, 실험 감도 요구 사항을 충족합니다.

표 4 각 화합물의 LOD 및 LOQ에 해당하는 신호 대 잡음비

그림 3 LOD 및 LOQ 농도에서 7가지 β-작용제의 이온 크로마토그램

3.4 정밀도 테스트

저, 중, 고 농도의 β-작용제 표준 물질 혼합 용액을 취하여 연속적으로 6회 주입하여 유지 시간 및 피크 면적 편차를 비교했습니다. 결과는 아래 표에 나와 있습니다. 모든 β-작용제는 1% 미만의 유지 시간 편차와 3% 미만의 피크 면적 편차를 보여 실험 요구 사항을 충족했습니다.

표 5 각 화합물에 대한 정밀도 테스트

그림 4 7가지 β-작용제의 정밀도 테스트 크로마토그램 (6회 주입)

3.5 시료 테스트

시장에서 구입한 돼지고기 시료를 언급된 전처리 방법에 따라 테스트했으며, β-작용제는 검출되지 않았습니다. 7가지 β-작용제에 해당하는 유지 시간에서 크로마토그래피 피크가 관찰되지 않았으며, 다른 피크는 효소 가수 분해 후 매트릭스 신호를 나타냅니다.

그림 5 돼지고기 시료 테스트 크로마토그램

4. 결론

이 방법은 Wayeal LCMS-TQ9200 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분석 시스템을 사용하여 돼지고기 내 β-작용제를 측정합니다. 데이터는 모든 크로마토그래피 피크가 테일링 없이 우수한 형태를 보이고, 감도가 실험 요구 사항을 충족하며, 선형 상관 계수가 0.99를 초과하고, 정밀도가 만족스러우며 각 화합물의 6회 연속 주입에 대해 유지 시간 편차가 1% 미만이고 피크 면적 편차가 3% 이내임을 보여줍니다. 돼지고기 시료 테스트에서 β-작용제는 검출되지 않았습니다. 이러한 결과는 Wayeal LC-MS/MS 시스템을 갖춘 이 방법이 표적 분석물의 일상적인 정성 및 정량 검출 요구 사항을 충족함을 나타냅니다.