닭고기 고기에 있는 앰페니콜 항생제 잔류의 결정 Wayeal LCMS-TQ9200

키워드:LCMS, 암페니콜, 식품 안전성, 수의약품 잔류물

1기기 및 반응제

1.1 LCMS 구성 목록

표 1 기기 구성 목록

1.3 실험자재와 보조장비

초음파 청소기

포터스 믹서

물 욕조 질소 증발기

고속 원심분리기

2실험 방법

2.1 용액 준비

2.1.1 2%의 아모니아 에틸 아세테트 용액: 4mL의 암모니아 물을 받아 에틸 아세테트로 200mL까지 희석합니다.

2.1.2 4% 나트륨 클로라이드 용액: 나트륨 클로라이드 4g를 받아 물에 녹여 100mL까지 희석합니다.

2.1.3 4% 나트륨 엽록소 포화 n- 헥산 용액: 4% 나트륨 엽록소 용액의 적절한 양을 받아, n- 헥산 과잉을 첨가하고 섞고, 층 분리가 일어나도록 허용합니다.그리고 n-헥산 상층을.

2.1.4 혼합된 내부 표준 작업 용액: 혼합된 내부 표준 원산물 용액의 적절한 양을 취합니다.열암페니콜-D5을 10ng/mL 및 다른 내부 표준 (플로르페니콜-D3) 에서 얻기 위해 20%의 메탄올로 희석합니다., 티암페니콜-D3 및 플로르페니콜 아민-D3) 각각 50ng/mL입니다.

2.2 표본 전처리

2.2.1 표본 추출: 2g의 표본을 무게 (±0.01g의 정확성) 로 가량하고, 혼합된 내부 표준 작업 용액 100μL을 첨가하고, 1분 동안 소용돌이를 하여, 2%의 암모니아 에틸 아세테트 용액 10mL을 첨가한다.10분 동안 소용돌이, 5분 동안 8000rpm에서 원심분해하고, 초상태 물질을 수집합니다. 잔액에 2%의 암모니아 에틸 아세테트 용액의 또 다른 10mL을 첨가하고 추출 절차를 반복합니다.두 개의 초원자를 결합합니다., 50°C의 질소 흐름 아래에서 건조할 때까지 증발하고 사용을 위해 보관합니다.

2.2.2 표본 정화: 정화 잔류에 4% 나트륨 엽산 용액 3mL를 첨가하고, 소용돌이, 그 다음 4% 나트륨 엽산 포화 n-헥산 용액 5mL을 첨가하고, 30초 동안 소용돌이,원심분기 8000 rpm 5분 동안, 그리고 상단 n-hexane 층을 폐기합니다. 탈지방 절차를 한 번 반복합니다. 2%의 암모니아 에틸 아세테트 용액의 5mL를 첨가하고, 10분 동안 소용돌이, 5분 동안 8000 rpm에서 원심분해그리고 수퍼나넌트를 수집합니다.잔액에 2%의 암모니아 에틸 아세테트 용액의 또 다른 5mL를 첨가하고 추출 절차를 반복합니다. 초상태 물질을 결합하고 50°C의 질소 흐름 아래에서 건조해질 때까지 증발합니다.20% 메탄올 용액 1mL를 첨가합니다.30초 동안 회전하고, 막을 통해 필터링하고, 기기 분석을 기다립니다.

2.3 실험 조건

2.3.1 액체 염색체 촬영 조건

크로마토그래피 컬럼: C18 1.7μm 2.1x50mm

이동 단계: A: 아세토니트릴; B: 물 속의 2mM 암모늄 포맷

흐름 속도: 0.3mL/min

열대 온도: 40 °C

주입 부피: 5μL

2.3.2 질량 분광 조건

표 3 이온 소스 매개 변수

3실험 결과

3.1 표준 염색체

4개의 아미드 항생제와 그 내부 표준의 결정은 6분 이내에 완료되었습니다. 모든 피크는 꼬리 없이 좋은 피크 형태를 보여주었습니다.그리고 각 화합물은 만족스러운 반응을 보여주었습니다., 실험 요구 사항을 충족합니다.

그림 1 4 Amphenicol 항생제 염색체 및 내부 표준 (Chloramphenicol 0.2ng/mL, 다른 항생제 1ng/mL)

3.2 선형 범위

아미드 알코올 혼합 표준 용액의 적절한 양을 채우고 표준 곡선을 만들기 위해 일련의 농도로 단계적으로 희석합니다.양적 분석을 위해 동위원소 내부 표준 방법이 사용되었습니다.선형 범위는 클로람페니콜의 0. 2 ~ 10 ng / mL, 플로르페니콜 아민, 티암페니콜 및 플로르페니콜의 1- 50 ng / mL입니다.선형 검출 결과와 알려진 농도의 오차는 허용 최대 오차보다 작았습니다., R2 값은 0.9958에서 0 사이입니다.9998, 모든 구성 요소에 대한 우수한 선형성을 나타냅니다.

표 4 화합물의 선형 범위

그림 2 네 가지 화합물의 캘리브레이션 곡선 데이터

3.3 LOD와 LOQ

중국 국가 식품 안전 표준 GB 31658.20-2022은 이 방법의 경우 클로람페니콜의 검출 한계 (LOD) 는 0.1μg/kg이고 수치화 한계 (LOQ) 는 0이라고 명시하고 있습니다.2μg/kg; 티암페니콜, 플로르페니콜 및 플로르페니콜 아민의 경우 LOD는 0.5μg/kg이며 LOQ는 1μg/kg입니다.모든 대상 화합물의 신호-음향 비율은 검출 한계 (LOD) 및 정량화 한계 (LOQ) 의 지정 농도에서 3과 10보다 크게 높습니다.국가 표준에 명시된 감수성 요구 사항을 준수합니다.

표 5 각 화합물의 검출 및 정량화 한계

그림 3 4개의 화합물의 검출 한계와 정량화 한계 크로마토그램

3.4 정밀 테스트

낮은, 중간, 높은 농도의 암페니콜 표준 혼합 용액을 복용하고, 유지 시간 및 피크 영역의 오차를 비교하기 위해 6개의 연속 주사를 실시합니다.결과는 아래 표에서 나타납니다.모든 암페니콜 화합물의 보유 시간 오차는 1% 미만이었고, 피크 영역 오차는 5% 미만이었습니다.국가 표준에 명시된 RSD ≤ 15%의 정확성 요구 사항을 충족합니다..

표 6 각 화합물의 정밀 시험

그림 4 4 아미드 알코올 화합물의 정밀 염색체

3.5 매트릭스 스파이크 복구 테스트

이 검출 방법의 정확성은 스파이크 복원 테스트를 사용하여 평가되었습니다. 전처리를 위해 빈 매트릭스 샘플에 표준 샘플의 알려진 농도를 다른 비율로 추가하십시오.높은 온도에서 매트릭스 스파이크 샘플을 준비하는, 중간 및 낮은 농도에서 피크 된 샘플의 각 농도 수준은 독립적으로 6 번 분석되었습니다.회복률은 매트릭스에서 발견 된 농도를 첨가하기 전과 후에 비교하여 계산되었습니다.그 결과 결과는 다음과 같습니다: 닭고기 매트릭스에서 모든 화합물의 스파이크 회수율은 94.5%에서 107.2%까지,정확도가 방법 요구 사항을 충족한다는 것을 나타내는.

표 6 튀긴 닭고기 매트릭스의 화합물의 회복률

3.6 샘플 테스트

슈퍼마켓에서 무작위로 구입한 닭가슴 샘플은 앞서 언급한 샘플 전처리 방법을 사용하여 추출되고 정화되었습니다.4개의 아미드 항생제 중 어느 것도 검출되지 않았습니다..

그림 5 슈퍼마켓에서 치킨 가슴 샘플에서 네 아미드 알코올 화합물의 염색체

4결론

이 방법은 동물성 식품에서 암페니콜 항생제를 결정하기 위해 Wayeal LCMS-TQ9200 액체 염색체 질량 분광계를 사용합니다.양성 및 음성 이온 모드에서 화합물을 동시에 획득 할 수 있습니다.데이터에 따르면, 이 방법은 잘 형성된 크로마토그래픽 픽을 힐링 없이 제공하며, 그 민감도는 국가 표준 요구 사항을 충족시킵니다.선형 상관률은 모두 0보다 크죠.996개의 연속 주입에서 모든 화합물의 보유 시간 오차는 1% 이내이고, 최고 부위의 오차는 5% 이내로, 좋은 정확도를 보여줍니다.닭고기 매트릭스의 회복률은 94에서.5%에서 107.2%까지, 5% 내의 CV로 정확도가 방법론적 요구 사항을 충족한다는 것을 나타냅니다. 슈퍼마켓에서 무작위로 구입 한 닭 가슴 샘플을 분석했습니다.그리고 4개의 암페니콜 항생제 중 어느 것도 검출되지 않았습니다.이것은 Wayeal의 액체 염색체 질량 분광 시스템으로 장착된 방법이대상 표본의 질적 및 양적 검출을 위한 규칙적인 요구사항을 충족합니다..