액체 염색법으로 음료에 있는 카페인 함량의 결정

카페인은 천연 메틸 엑산틴 알칼로이드로 커피 콩, 차 잎, 카카오 콩과 같은 원료에 널리 존재한다.그것은 상업적으로 사용할 수있는 음료에 핵심 기능적 첨가물 및 특징적 인 맛 화합물로 사용됩니다.카페인 을 적당 히 섭취 하는 것 은 정신 을 상쾌 시키고 피로 를 완화 시키는 것 과 같은 생리적 효과 를 발휘 할 수 있다.하지만, 과도하고 장기적인 섭취는 심장 박동, 불면증 및 신경 과민성 등 부작용을 쉽게 유발할 수 있습니다.어린이, 심혈관 질환을 앓고있는 개인은 더 낮은 내성 경계에 있습니다.여러 나라의 식품 안전 표준은 음료의 카페인 함량에 대한 명확한 규제 제한을 설정했습니다..

중국에서는 국가 식품 안전 표준 " 음료에 있는 카페인의 결정" (GB 5009.139-2014) 는 음료 매트리스의 카페인의 정량 결정에 대한 법적 근거로 사용됩니다.고성능 액체 염색체 (HPLC) 는 탁월한 해상도, 매트릭스 간섭에 강한 저항 능력, 그리고 높은 수치 정확성으로 인해복합 행렬 표본 분석에 대한 선택의 방법이되었습니다, 다양한 복합 음료, 우유 함유 음료 및 허브 기능 음료 포함.이 실험은 국가 표준 GB 5009에 명시된 고성능 액체 염색체 검사 방법에 따라 수행되었습니다..139-2014 음료 샘플에 대한 샘플 전처리 및 액체 염색체 분리/탐지 프로토콜그리고 다양한 종류의 음료에 있는 카페인의 질적 식별과 양적 분석을 수행.

키워드: 고성능 액체 염색체; 카페인; 음료; 함유량 결정

1기기 및 반응제

1.1 액체 염색체 시스템 구성 목록

표 1. 기기 구성 목록

1.2 반응제 및 표준 목록

표 2. 반응제 및 표준 목록

1.3 실험자재와 보조장비

초음파 청소기

포르텍스 믹서;

0.45μm 마이크로 포러스 수분화 필터막

2실험 방법

2.1 표준 솔루션의 준비

2.1.1 카페인 표준 주식 용액 (2.0mg/mL): 카페인 기준 20mg를 (10mL 용량 콜러에 가장 가까운 0.1mg까지) 정확하게 무게를 씌우고 메탄올로 용량까지 녹여 채우고.냉장고에서 4°C. 유효기간은 6개월입니다.

2.1카페인 표준 중간 용액 (200μg/mL): 5.0mL의 카페인 표준 주식 용액을 정확하게 전달합니다 (2.1.1) 50mL 용량 플라스크에 넣고 물로 부피까지 채우고 냉장고에서 4°C. 유효기간은 1개월입니다.

2.1.3 캘리브레이션 곡선에 대한 카페인 표준 작업 용액: 카페인 표준 중간 용액의 0.5 ml, 1.0 mL, 2.0 mL, 5.0 mL 및 10.0 mL을 전송 (2.1.2) 10 ml의 분자 콜러에 넣고 물로 부피까지 채웁니다. 이 표준 시리즈의 결과 농도는 10입니다.0μg/mL, 200μg/mL, 40.0μ100g/mLμg/mL 및 200μ사용 직전에 준비합니다.

2.2 표본 전처리

2.2.1 콜라형 음료

(a) 탈가스: 초음파 청소기를 사용하여 샘플을 음향화합니다.°C는 5분.

(b) 정화: 샘플의 5g를 무게 (정밀 0.001g), 5mL 용량 콜러로 옮기기그리고 물로 부피까지 보충합니다 (시험 용액의 카페인 함량이 캘리브레이션 곡선 범위 내에 있는지 확인합니다). 철저히 섞어 마그네슘 산화물 0.5g를 첨가하고 잘 흔들고 서도록 한다. 초상성 물질을 가져다가 미세포로스막을 통해 필터링하여 후속 분석을 한다.

2.2.2 우유를 함유한 액체 커피 및 차 제품

표본의 1g를 무게 (정밀 0.001g) 로 10mL 용량 콜러에 옮기십시오.그리고 삼엽산 용액으로 부피까지 보충합니다 (시험 용액의 카페인 함량이 캘리브레이션 곡선 범위 내에 있는지 확인합니다)잘 섞고 단백질 침착을 위해 서둘러라. 초상성 물질을 받아 후속 분석을 위해 마이크로 포로스막을 통해 필터링한다.

2.3 실험 조건

2.3.1 염색학적 조건

칼럼: C18, 4.6×250mm, 5μm

이동 단계: 메탄올/물 = 24/76 (v/v)

흐름 속도: 1.0 mL/min

기둥 온도: 25°C

탐지 파장: 272nm

주입 부피: 10μL

3실험 결과

3.1 빈

그림 1. 빈 용매의 염색체

3.2 선형 범위

그림 2. 카페인 기준 표준의 선형성 결과

표 3. 카페인 기준 표준의 선형성 범위

3.3 반복 가능성

그림 3. 카페인 기준 표준의 반복성 염색체 (n = 6)

표 4. 카페인 기준 표준의 반복성 염색학적 매개 변수 (n = 6)

3.4 표본

그림 4. 특정 브랜드의 콜라 음료 샘플의 염색체

표 5. 특정 브랜드의 콜라 음료 샘플에 대한 염색학적 결과

그림 5. 특정 브랜드의 우유 차 음료 샘플의 염색체

표 6. 특정 브랜드의 우유 차 음료 샘플에 대한 염색성 결과

3.5 스피킹 복구

그림 6. 특정 브랜드의 콜라 음료 샘플에 대한 스파이킹 복구 염색체 (스파이킹 농도: 40μg/mL)

표 7. 특정 브랜드의 콜라 음료 샘플에서 스파이킹 복구에 대한 염색학적 결과 (스파이킹 농도: 40μg/mL)

그림 7. 우유 차 음료 샘플의 특정 브랜드의 스피킹 복구 염색체 (스피킹 농도: 40μg/mL)

표 8. 특정 브랜드의 우유 차 음료 샘플에서 스파이크 회복을 위한 염색학적 결과 (스파이크 농도: 40μg/mL)

3.6 탐지 한계

그림 8. 특정 브랜드의 콜라 음료 샘플의 검출 한도를 나타내는 염색체

표 9. 특정 브랜드의 콜라 음료 표본의 검출 한도의 염색학적 결과

그림 9. 우유 차 음료 샘플의 특정 브랜드의 검출 한도의 염색체

표 10. 우유 차 음료 샘플의 특정 브랜드의 검출 한도의 염색체 결과

4결론

이 실험은 GB 5009.139-2014 "국가 식품 안전 표준"에 따라 수행되었습니다.∙음료 샘플에서 카페인을 결정하기 위해 다이오드 배열 탐지기 (DAD) 를 장착 한 Wayeal LC3500 액체 염색체 시스템을 사용하여실험 자료는 목표 피크가 높은 이론 판 번호와 대칭 모양을 보여주었습니다.10의 농도 범위에서 표준 용액 시리즈에 대한 캘리브레이션 곡선0μg/mL에서 200까지0μg/mL은 선형 상관률이 0보다 높았습니다.9999이 방법은 훌륭한 반복성을 나타냈으며, 유지 시간 및 피크 영역 모두에 대한 RSD 값은 0.3% 이하로, 좋은 기기 정밀도를 나타냅니다.∙콜라와 우유 차∙테스트되었습니다. 그들의 카페인 함량은 각각 95.051mg/kg 및 260.0456mg/kg로 결정되었습니다. 스파이크 회수율은 94% 이상으로 높은 회수 효율을 나타냅니다.무시할 수 없는 샘플 손실, 안정적이고 신뢰할 수있는 사전 처리 절차. 탐지 한계 (LODs) 는 콜라 유형의 음료에 대해 0.0446mg/kg 및 우유를 포함하는 차 기반 음료에 대해 0.75mg/kg이었습니다.기기의 높은 민감도와 낮은 기준 소음을 반영합니다..