Wayeal 고성능 액체 크로마토그래피와 ELSD 검출기를 이용한 스펙티노마이신 정량

증발성 광분산 탐지기 (ELSD) 는 기체성 입자를 형성할 수 있는 모든 화합물에 이론적으로 적용 가능한 새로운 질량 탐지기입니다.2025년판의 약국에는 100종 이상의 약물의 분석과 품질 통제를 위해 증발성 광산 분산 탐지 (ELSD) 를 사용하는 것이 명시되어 있습니다.실무에서 ELSD는 아스트라갈로사이드, 탄수화물, 아미노글리코사이드 및 콜레스테롤과 같은 자외선 (UV) 흡수가 부족한 화합물에 더 자주 사용됩니다.종종 자외선 및 형광 탐지기에 대한 보완적 탐지 방법으로 사용됩니다.그러나 ELSD 결과는 이동성 단계 구성, 유기 용매 농도, 발화 방식 및 nebulization 조건 등 여러 가지 요인에 의해 영향을 받는다. 따라서,정확하고 일관된 분석 결과를 보장하기 위해, 이러한 요소들이 결과에 미치는 영향을 평가하는 것이 중요합니다.
이 연구는 2025 약국 제2부에서 스펙티노마이신 하이드로클로라이드에 대한 분석 방법을 참조하고 ICH QbD 원칙에 따라 수행되었습니다.분석 조건을 스크린하고 최적화하기 위해 직각 실험 디자인을 사용.

그림 1 스펙티노마이신 하이드록로라이드

2도구와 방법

이 연구에서 염색체 분석은 Wayeal의 LC3200 시리즈 HPLC 시스템을 사용하여 수행되었습니다. 기기 구성에는 쿼터너 경사 펌프, 자동 샘플러,기둥 칸막이, 그리고 증발성 빛 분산 탐지 장치. 시스템 제어 및 데이터 획득/처리 는 SmartLab 2.0 염색성 소프트웨어로 수행되었습니다.

표 1 HPLC 조건

3용액 준비

표본 용액:스펙티노마이신 하이드록로라이드 주식 용액은 10 mg/ ml의 고농도와 99. 8%의 순도를 가진 고객으로부터 제공되었습니다.

0.1M 트리플루로아세트산 수액:정밀하게 6.8mL의 트리플루로아세트산을 1000mL의 볼륨 플라스크에 삐핏합니다. 정제된 물로 표시까지 희석하고 잘 섞습니다. 마지막으로 0.사용 전에 45μm 셀룰로오스 막 필터.

표준 솔루션:원산물 용액은 정제된 물로 희석하여 0의 농도를 가진 샘플 용액을 준비했습니다.15, 0.25, 0.35, 0.50각 용액은 사용 전에 0.45μm 셀룰로오스 막 필터를 통해 필터링되었습니다.

4결과와 논의

중국 약국에서는 같은 크로마토그래픽 조건을 사용하여 관련 물질과 주요 구성 요소의 함량을 분석합니다.이 방법은 "탐지기가 실제 상황에 따라 구성될 수 있다."연구 도중, ELSD3260의 기기 특성을 고려하여, 분석 방법의 요구 사항 및 관련 문헌,여러 실험 매개 변수를 스크린하기 위해 플래켓-버먼 실험 설계가 사용되었습니다. (표 2 및 3)그 후, ELSD 탐지기의 피크 영역 응답을 최적화하기 위해 박스-베헨켄 설계 ( 테이블 4) 가 사용되었습니다.

표 2 플래켓-버먼 실험 설계

표 3 플래켓-버먼 실험 결과의 ANOVA 분석

표 3에서 볼 수 있듯이, 가스 흐름 속도, 이동 단계 흐름 속도, 그리고 열 후 보완은 부정적인 영향을 나타냈습니다. 구체적으로 가스 흐름 속도와 이동 단계 흐름 속도를 줄이면,함께 열 후 보상 비활성화, 염색학적 피크 응답을 증가시킬 수 있습니다. 그러나 이동 단계 흐름 속도를 감소하면 피크 확장이 증가하고 감지 민감도가 감소 할 수 있습니다. 따라서,흐름 속도는 표준 방법과 일치합니다.열대 온도와 검출 온도는 긍정적 인 효과를 나타냈지만 응답 값을 크게 향상시키지 않았습니다.후속 연구는 가스 흐름 속도를 최적화하는 데 초점을 맞출 것입니다., 네뷔라이저 온도, 그리고 증발기 온도

가스 흐름 속도, 네뷔라이저 온도,반응 값에 대한 증발기 온도 반응 표면 방법론 프레임워크 내에서 박스-베켄 실험 설계를 사용하여 조사되었습니다.실험 설계는 표 4에 제시되어 있습니다.

표 4 박스-벤켄 실험 설계

The detection conditions for spectinomycin hydrochloride were determined by simulating the peak area variation using response surface methodology (Figure 2) and considering the instrumental parameter ranges: 증발기 온도는 85°C, 증발기 온도는 80°C, 탐지기 온도는 50°C, 가스 흐름 속도는 0.2 SLM입니다.

A. 피크 영역에 가스 흐름 속도 및 증발기 온도의 영향

B. 피크 영역에 가스 흐름 속도 및 네뷔라이저 온도의 영향

C. 피크 영역에 대한 네뷔라이저 온도와 증발기 온도의 영향

그림 2 피크 영역의 변동

주사 정확성

스펙티노마이신 수소염의 원산물 용액은 0. 35mg/ mL로 희석되었고, 6번 연속 주입을 지정된 염색상 조건에서 염색체 기록으로 수행했습니다.스펙티노마이신 하이드록로라이드 크로마토그래픽 피크에 대한 유지 시간 및 피크 영역의 상대 표준편차 (RSD%) 가 계산되었습니다.그 결과는 5 표에서 나타납니다.

표 5 주입 정확성 시험 결과

특수성

분석 절차 검증에 관한 ICH Q2 ((R2) 가이드라인과 중국 약국 일반 챕터 ¥9101 ¥ 분석 방법 검증 지침에 따르면,최적화된 방법의 특수성이 검증되었습니다., 선형 범위, 정확성, 반복성

정제된 물과 샘플 용액 (0.35 mg/mL) 은 염색체 촬영과 병행하여 분석되었습니다.결과 (그림 3) 는 정제 된 물 염색체에서 스펙티노마이신 수소 염화소의 유지 시간에 염색상 최고치를 보여주지 않았습니다.표본 용액의 스펙티노마이신 하이드로클로라이드의 최고가 인접한 최고로부터 시작점 분리 (R > 1. 5) 를 달성했습니다.

그림 3 스펙티노마이신 수소염화물 샘플 (0.35mg/mL) 의 분석 결과

선형 범위

스펙티노마이신 하이드클로라이드 원산물 용액의 3개의 평행 샘플을 표준 용액 준비 방법에 따라 준비하고 염색학적 조건에서 분석합니다.그리고 염색체를 기록합니다.크로마토그래픽 피크 영역과 그에 따른 농도를 사용하여 회귀 분석을 수행합니다.

그림 4 선형성 테스트 결과 (로그-변형 vs 변형되지 않은)

문헌에 따르면 ELSD 응답 값과 농도 사이의 관계는 비선형입니다.회귀 분석을 수행하기 전에 응답 값과 농도의 로가리듬 변환이 필요합니다 [8].,9실험 데이터에 로가리듬 변환을 적용 한 후 선형 회귀 곡선의 상관 계수는 0을 초과했습니다.999, 이는 로가리듬 변환 없이 얻은 결과보다 현저히 낫습니다. (그림 4에서 보여드린 바와 같이).

정확성 과 반복성

스펙티노마이신 하이드록로라이드 원산물 용액은 0의 농도로 희석되었습니다.25, 0.35각 농도에 대해 3개의 평행 샘플을 준비하고, 지정된 염색체 조건에서 분석하고, 염색체를 기록했습니다.함량은 회귀 곡선을 사용하여 계산되었습니다., 회복성과 반복성이 평가되었습니다. 결과는 표 6에 표시됩니다.

표 6 회복 테스트 결과

정량화 한계 (LOQ)

스트렙토마이신 하이드록로라이드 원산물 용액을 12μg/mL의 농도로 희석하여 염색체 조건에서 표본을 분석하고 염색체를 기록한다.스트렙토마이신 하이드록로라이드 크로마토그래픽 피크의 신호/음소 비율 (S/N) 을 계산하고 그 반복성을 결정합니다.그 결과는 표 7에 나타납니다.

표 7 LOQ 테스트 결과

그 결과 ICH 가이드 라인 요구 사항에 따라 S/N > 10이 스펙티노마이신 하이드록로라이드 용액의 농도의 픽 영역의 상대 표준편차가 기준을 충족합니다.따라서 스펙티노마이신 하이드록로라이드의 정량 제한 기준으로 사용될 수 있습니다.

5결론

이 연구는 약서 방법을 기반으로 스펙티노마이신 하이드록로라이드를 수치화하는 신뢰할 수 있고 견고한 분석 절차를 만들었습니다.증발성 광분산 탐지기 (ELSD) 조건은 체계적으로 최적화되었습니다.최적화된 방법은 안정성과 정확성을 향상시켰고, 더 높은 감지 민감도와 만족스러운 선형 범위를 보여주었다.

ELSD3260 탐지기는 최근에 설계되고 개발된 저온 분기 흐름 탐지기로 비휘발성 물질과 반휘발성 물질을 분석하기에 적합합니다.자외선 흡수력이 없는 화합물에 대한 귀중한 대안이 연구에서, 스펙티노마이신 하이드록로라이드 분석을 위해 ELSD3260의 사용은 뛰어난 응답 값과 재생 가능성과 함께 향상 된 검출 민감성을 가져 왔습니다.이 연구 결과는 이 도구가 스펙티노마이신 하이드록로라이드의 정량 분석에 적합하다는 것을 보여줍니다..