고성능 액체 크로마토그래피를 이용한 식품 영양 강화제의 Uridine 5'-Monophosphate 정량

뉴클레오티드로서 UMP(Uridine 5'-monophosphate)는 살아있는 유기체 내 핵산 대사의 중추적인 중간체입니다. 이는 포유류 젖에 가장 풍부한 뉴클레오티드이며, 자손의 성장과 발달 동안 우리딜산염에 대한 식이 요구량이 다른 뉴클레오티드보다 상당히 높습니다. 최근 몇 년간 연구에 따르면 UMP는 에너지 대사 및 RNA 합성에 참여할 뿐만 아니라 세포 신호 전달 경로를 조절하여 장 장벽 기능을 향상시키는 것으로 나타났습니다. 또한 지용성 비타민과 시너지 효과를 발휘하여 영양소 흡수와 면역 기능을 촉진합니다. UMP는 일반적으로 유아용 조제분유와 가축/가금류 사료에 영양 강화제로 첨가되며, UMP의 순도와 농도는 최종 제품의 영양가와 안전성에 직접적인 영향을 미칩니다.

키워드:식품 영양 강화제, UMP, 뉴클레오티드, 고성능 액체 크로마토그래피.

1. 기기 및 시약

1.1 HPLC 구성 목록

표 1 HPLC 구성 목록

1.2 시약 및 표준

표 2 시약 및 표준 목록

1.3 실험재료 및 보조장비

초음파세척기

볼텍스 믹서

2. 실험방법 및 조건

크로마토그래피 컬럼: Nova Element AQC18, 5μm 4.6x250mm.

3. 실험결과

3.1 시스템 적합성 테스트

시스템 적합성 테스트를 통해 목표 피크의 모양이 양호하고 이론적 플레이트 수가 많고 근처에 간섭 피크가 없어 모든 실험 요구 사항을 충족한다는 것이 입증되었습니다.

그림 1 우리딘 5'-모노포스페이트 표준 작업 용액의 크로마토그램

표 3 우리딘 5'-모노포스페이트 표준 작업 용액에 대한 테스트 결과

3.2 반복성 테스트

유리딘 5'-모노포스페이트(UMP)의 표준 작업 용액을 6회 주입했습니다. 머무름 시간의 상대 표준 편차(RSD)는 0.085%, 피크 면적의 상대 표준 편차는 0.191%였습니다. 두 값 모두 지정된 한계인 2.0%보다 낮았으며 이는 실험 요구 사항을 준수함을 나타냅니다.

그림 2 유리딘 5'-모노포스페이트(UMP) 반복성 테스트의 크로마토그램

표 4 유리딘 5'-모노포스페이트(UMP)에 대한 반복성 테스트 결과

3.3 샘플 테스트

5'-우리딘일인산표준작업용액(20mg/L)의 피크면적은 322.525인 반면, 검체용액의 피크면적은 274.211이었다. 외부표준품 분석법에 따르면, 시료 내 UMP 함량은 17mg/L로 측정되었습니다.

그림 3 시험 시료의 크로마토그램

표 5 샘플 테스트 결과

3.4 관련물질에 대한 시스템 적합성 시험

관련 물질에 대한 시스템 적합성 솔루션 테스트에서는 모든 화합물 피크가 높은 이론 단수와 2.0보다 큰 분해능으로 모양이 양호하여 실험 요구 사항을 충족하는 것으로 나타났습니다.

그림 4 5'-우리딘 모노포스페이트(UMP) 표준 작업 용액의 크로마토그램

표 6 5'-우리딘 모노포스페이트(UMP) 표준 작업 용액에 대한 테스트 결과

3.5 시료 재현성 테스트

시스템 적합성 용액을 6회 연속 주입한 후, 5'-UMP, 우라실 및 우리딘의 머무름 시간 반복성은 각각 0.031%, 0.058%, 0.102%였으며, 피크 면적 반복성은 각각 0.243%, 0.134%, 0.134%로 실험 요구 사항을 충족했습니다.

그림 5 시료 재현성 테스트 크로마토그램

표 7 관련 물질의 머무름 시간 반복성에 대한 테스트 결과

표 8 관련 물질의 피크 면적 반복성에 대한 테스트 결과

3.6 관련물질 민감도시험

관련 물질에 대한 민감도 테스트 솔루션의 5'-UMP 주요 피크의 신호 대 잡음비는 3보다 훨씬 커서 실험 요구 사항을 충족합니다.

그림 6 유연물질 민감도시험액 크로마토그램

표 9 유연물질 민감도 용액 시험 결과

3.7 관련 물질 참조 및 샘플 솔루션 테스트

기준 용액(17mg/L)의 피크 면적은 275.856이었습니다. 시험용액 중 5'-우리딘일인산을 제외한 불순물의 총 피크면적은 38.021이었다. 외부 표준법으로 계산한 결과, 시료의 불순물 함량은 2.343mg/L입니다.

그림 7 유연물질 표준액 시험 크로마토그램

표 10 유연물질 대조액 시험 결과

그림 8 유연물질 시료용액 시험 크로마토그램

표 11 관련 샘플 용액에 대한 테스트 결과

4. 결론

본 실험에서는 "GB 1903.69-2024 국가식품안전표준: 식품영양증강제 5'-우리딘 모노포스페이트"를 참고하여 자외선 검출기가 장착된 고성능 액체 크로마토그래피 시스템인 Wayeal LC3200을 이용하여 분석을 진행하였다. 실험 결과는 시스템 적합성 테스트에서 모든 화합물에 대해 우수한 피크 모양, 높은 이론 단수 및 2.0 이상의 분해능을 보여 실험 요구 사항을 충족하는 것으로 나타났습니다. 5'-우리딘 일인산 표준액 및 관련 물질의 머무름 시간 반복성은 0.2% 이하, 피크 면적 반복성은 0.3% 이하로 재현성이 양호함을 나타냅니다. 유연물질 민감도 시험액은 5'-우리딘 모노포스페이트 주요 피크에 대한 신호 대 잡음비가 3보다 크게 나타나 실험 요구 사항을 충족했습니다. 샘플 테스트 결과는 모두 정상이었습니다. 위의 데이터는 표준 방법에 지정된 기기 요구 사항을 충족합니다.