돼지고기 내의 니트로이미다졸 잔류: Wanyi LCMS-TQ9200 LC-MS/MS 방법 GB 31658.23-2022에 따라 검증
2026-10-21
니트로이미다졸은 혐기성 세균과 트리코모나스에 효과적인 합성 항균 및 항원충 약물입니다. 과거에는 가축 및 양식업에서 소화기 감염 및 원충성 질병을 통제하고 생존율을 개선하기 위해 널리 사용되었습니다. 그러나 모약물과 그 대사산물은 독성이 입증되었습니다. 동물에서 여러 활성 대사산물로 빠르게 대사되며, 일부는 모화합물보다 조직에 훨씬 더 오래 잔류합니다.
독성학 연구에 따르면 니트로이미다졸 모약물과 주요 대사산물은 잠재적으로 발암성, 변이원성 및 유전독성이 있습니다. 동물 유래 식품의 잔류물은 식품 사슬을 통해 인체로 유입되며, 장기간 저용량 섭취는 조혈 작용을 방해하고, 염색체를 손상시키며, 유전자 돌연변이 위험을 높일 수 있습니다. 따라서 중국은 식용 동물에 니트로이미다졸 사용을 금지했으며, 동물 유래 식품에는 잔류물이 허용되지 않아 식품 안전을 위해 정확한 잔류물 검사가 필수적입니다.
액체 크로마토그래피 탠덤 질량 분석법을 이용한 동물 유래 식품의 니트로이미다졸 잔류물에 대한 국가 식품 안전 표준인 GB 31658.23-2022가 이 작업의 법적 근거입니다. 이는 소, 양 및 기타 동물 매트릭스에서 모약물 및 대사산물을 다룹니다. 시험 실험실에서는 돼지고기에서 메트로니다졸, 하이드록시메트로니다졸, 디메트리다졸 및 하이드록시디메트리다졸 등 4가지 표적 화합물에 대한 검증된 워크플로우가 필요했습니다. 특히 보유 및 이온화가 어려운 하이드록시 대사산물을 ppb 이하 수준에서 낮은 잔류량과 긴 주입 시퀀스에 걸쳐 안정적인 정밀도로 분석해야 했습니다.
| 항목 | 구성 |
|---|---|
| LC-MS/MS 시스템 | Wanyi LCMS-TQ9200 삼중 사중극자 |
| 분석 컬럼 | C18, 1.6 um, 2.1 x 100 mm |
| 이동상 A | 물 중 0.1% 포름산 |
| 이동상 B | 아세토니트릴 중 0.1% 포름산 |
| 유속 | 0.3 mL/min |
| 컬럼 온도 | 40 °C |
| 주입량 | 4 uL |
| 보조 장비 | 초음파 수조, 볼텍스 믹서, 고속 원심분리기, 항온수조, 질소 증발기, 분석 저울 |
50 mL 원심분리 튜브에 시료 2g (0.05g 정확도)을 칭량하고, 1 ug/mL 혼합 내부 표준 작업 용액 10 uL를 첨가한 후 30초간 볼텍싱하고 10분간 방치합니다. 에틸 아세테이트 15 mL를 첨가하고 2분간 볼텍싱한 후 10,000 rpm으로 5분간 원심분리합니다. 상등액을 옮기고 에틸 아세테이트 15 mL로 추출을 한 번 더 반복합니다. 두 추출액을 합쳐 25 °C 항온수조에서 질소 하에 건조될 때까지 증발시킵니다.
잔류물을 0.1 mol/L 염산 5 mL에 녹이고 1분간 볼텍싱한 후, n-헥산 5 mL를 첨가하고 1분간 흔들어 5,000 rpm으로 5분간 원심분리합니다. 헥산 층을 폐기하고 다른 헥산 5 mL로 탈지 단계를 한 번 더 반복합니다. 고체상 추출 카트리지를 0.1 mol/L 염산 3 mL와 메탄올 3 mL로 컨디셔닝하고, 수층을 로딩한 후 0.1 mol/L 염산 3 mL로 세척하고 메탄올 4 mL로 용출합니다. 용출액을 35 °C에서 질소 하에 건조시키고, 물 0.5 mL에 재용해한 후 1분간 볼텍싱하고 주입 전에 여과합니다.
| 매개변수 | 결과 |
|---|---|
| 분석 시간 | 4가지 분석물질과 내부 표준물질이 8분 이내에 분리되었으며, 대칭적인 피크와 강한 응답을 보였습니다. |
| 직선성 | 2, 4, 20, 40, 200 및 400 ug/L에서 매트릭스 일치 보정; 모든 4가지 화합물에 대해 R2가 0.9995 이상이고, 편차가 20% 한계 미만이었습니다. |
| LOD 및 LOQ | 0.5 ug/kg에서 신호 대 잡음비가 3 이상이고 1 ug/kg에서 10 이상으로, 0.5 ug/kg LOD 및 1 ug/kg LOQ 요구 사항을 충족했습니다. |
| 정밀도 (n = 6) | 2 ng/mL에서 RSD가 6% 미만이고 20 ng/mL에서 3% 미만으로, 10% 한계 내였습니다. |
| 잔류 | 400 ng/mL 최고 표준물질 주입 후 빈 주입에서 LOQ 피크 면적의 20%보다 훨씬 낮았습니다. |
| 스파이크 회수율 | 2 ng/mL에서 61.8% ~ 103.35%, 20 ng/mL에서 104.35% ~ 107.15%로, 60% ~ 120% 요구 사항 내였습니다. |
| 실제 돼지고기 시료 | 4가지 니트로이미다졸 중 어느 것도 검출되지 않았습니다. |
빈 돼지고기 추출물에서의 매트릭스 일치 보정은 육류 매트릭스로 인한 이온 억제를 보상하고 ppb 수준에서 정량화를 신뢰할 수 있게 유지합니다. 피크 모양이 좋고 테일링이 없어, 에틸 아세테이트 추출, 헥산 탈지 및 SPE 정제가 1 ug/kg에서 간섭을 제거함을 확인했습니다.
Wanyi LCMS-TQ9200 LC-MS/MS 시스템은 GB 31658.23-2022에 따라 돼지고기에서 4가지 니트로이미다졸 잔류물에 대한 검증된 방법을 제공했습니다. 대칭적인 피크, 0.9995 이상의 R2, 10% 이내의 정밀도, 무시할 수 있는 잔류량 및 60% ~ 120% 이내의 회수율은 이 워크플로우가 금지된 수의학 약물 스크리닝 및 확인에 대한 일상적인 정성 및 정량 요구 사항을 충족하며, 식품 안전 위험 모니터링에 대한 신뢰할 수 있는 기술 기반을 제공함을 보여줍니다.
- 삼중 사중극자 MRM 획득은 지방이 많은 육류 매트릭스에서 0.5 ug/kg 수준의 금지된 잔류물을 확인하는 데 필요한 선택성을 제공합니다.
- 0.3 mL/min의 유속과 2.1 mm 컬럼에서 2 um 미만의 C18 화학은 8분 이내에 4가지 분석물질을 분리하며, 용매 소비량이 적습니다.
- 동위원소 표지 내부 표준물질은 추출 및 SPE 중 회수율 손실을 보정하여 배치 간 결과의 안정성을 높입니다.
- SPE 전 헥산 탈지는 카트리지와 분석 컬럼을 보호하여 고처리량 잔류물 실험실의 수명을 연장합니다.
